《表2 用于AFLP分析的接头和引物序列》

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《基于AFLP标记的贵州及其邻省薏苡种质资源遗传多样性分析》

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参照孙凤梅等（2014）的方法进行AFLP分析，适当优化调整。用于AFLP分析的接头和引物序列见表2。取DNA样品约250 ng，用Eco R I和Mse I 37℃酶切3 h，再65℃酶切3 h。用T4连接酶将酶切产物与50μmol/L Eco R I接头和Mse I接头在16℃水浴中连接12 h，连接产物用ddH2O稀释5倍后用作预扩增模板。预扩增反应体系:2×PCR Mix 10.0μL，预扩增模板4.0μL，20μmol/L E00和M00各1.0μL，ddH2O补足至20.0μL。预扩增程序:94℃预变性3 min；94℃45 s，50℃45 s，72℃60 s，进行26个循环；72℃延伸10 min。将预扩增产物稀释20倍后用作选择性扩增模板，以6对AFLP引物组合（含3个选择性核苷酸的FAM标记的Eco R I引物和未标记Mse I引物的引物组合）进行选择性扩增，扩增程序:95℃预变性5 min；95℃35 s，65℃（每循环降低0.7℃）35 s，72℃60 s，进行12个循环；94℃30 s，56℃30 s，72℃60 s，进行23个循环；72℃延伸10 min。将扩增产物稀释10倍后，取1.0μL与15.0μL Hi-Di甲酰胺和LIZ-500溶液（100∶1）混合后进行ABI3730XL毛细管电泳，并利用Genemarker对6对引物组合扩增产物原始数据进行分析，将各泳道内分子量内标的位置与各样品峰值的位置进行比较，得出片段大小。