《表5 AFLP标记选择性扩增引物序列》

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《甘蔗与河八王杂交后代染色体传递及河八王血缘在后代中的遗传》

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参考Liu等（2017）的方法，将引物上游序列5'端均进行FAM荧光标记（表5），然后与下游引物配对（未进行荧光标记）。利用Eco RⅠ和MseⅠ限制性内切酶进行DNA酶切，连接人工接头（引物为E～F:5'-CTCGTAGACTGCGTACC-3'，E～R:5'-AATTGGTACGCAGTC-3'和M～F:5'-GACGATGAGTCCTGAG-3'，M～R:5'-TACTCAGGACTCAT-3'）；对连接产物进行预扩增（引物E～P:5'-GACTGCGTACCAATTC A-3'，M～P:5'-GATGAGTCCTGAGTAAC-3'）。预扩增反应程序为:预变性94℃30 s，56℃30 s，72℃80 s，30个循环；选择性扩增反应程序为:第一轮扩增参数预变性94℃30 s，65℃30 s，72℃80 s，以后每轮循环退火温度递减0.7℃，扩增14轮，接着按94℃30 s，55℃30 s，72℃80 s，23个循环结束，包括94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸1 min；最后72℃延伸5 min。扩增产物经95℃变性10 min后进行毛细管电泳检测。