《表2 两个In Del标记的位置、引物序列及预期扩增片段长度》

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《大豆分枝数相关分子标记开发及qBN-18位点精细定位》

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根据亲本定位区间随机测序发现，55，882，277与55，946，270位点分别存在1个In Del标记，从Phytozome（https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html)下载含In Del变异位点的序列，利用Primer3web（http://primer3.ut.ee/）网站分别设计包含In Del的标记BR69与BR77的引物（表2）。为检测2个标记的灵敏度，用特异引物扩增12个不同浓度的KN24与KF19，DNA浓度分别为100、80、60、40、20、10、5、2、1、0.5、0.2、0.1 ngμL-1。PCR总反应体系为20μL，包括10×Easy Taq buffer 2.0μL、2.5 mmol L-1 d NTPs1.5μL、无菌水12.3μL、Easy Taq酶0.2μL、引物(2μmol L-1）2.0μL和DNA 2.0μL。反应程序为95℃5min；95℃30 s，54℃30 s，72℃30 s，36个循环；72℃5 min，4℃保存。用6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测In Del标记的扩增产物。筛选最适DNA浓度用于鉴定RIL群体基因型。