《表2 引物和探针序列：血浆HOXA7基因甲基化在非小细胞肺癌诊断中的应用》

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《血浆HOXA7基因甲基化在非小细胞肺癌诊断中的应用》

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采用定量甲基化特异PCR（quantitative methylation-specific PCR，qMSP）检测患者ctDNA中HOXA7基因甲基化水平，引物和探针序列见表2。每个反应体系为25μL，包括2μL亚硫酸修饰后的DNA、300 nmol/L正向引物和反向引物、100 nmol/L探针、100 nmol/L荧光染料、1.67 mmol/L dNTPs和1 mL Platinum Taq DNA聚合酶（美国Invitrogen公司）。在96孔板中每个样本重复3次。反应条件为95℃5 min，95℃15 sec，65℃1 min，72℃1 min，共50个循环在Step One Plus RealTime PCR仪（美国Applied BioSystems公司）上进行扩增。HOXA7的甲基化水平的计算采用2-ΔCT表示[9]。