《表1 本文引物序列：探讨多基因甲基化检测评估非小细胞肺癌的临床诊断价值》

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《探讨多基因甲基化检测评估非小细胞肺癌的临床诊断价值》

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DNA亚硫酸氢盐修饰按照Epi Tect Bisulfit Kit试剂盒说明书进行。采用Epi Tect MSP Kits试剂盒对DAPK、P16、Runx3基因引物进行MSP扩增（表1）。具体反应体系和程序如下:设计合成的上游引物1μL，设计合成的下游引物1μL，修饰后DNA模板2μL，2×Taq PCR MasterMix 12.5μL，用无RNase水将总体积补至25μL。PCR反应程序为:预变性95℃10 min，变性95℃30 s，退火60℃30 s，延伸72℃30 s，共进行35 cycle的扩增，后延伸72℃5 min。同时，对上述PCR过程中的扩增，进行无RNase水的空白对照，以甲基化转移酶处理的DNA为阳性对照。PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳进行检测，根据甲基化（M）和未甲基化（U）条带情况判定DAPK、P16、Runx3基因在入组患者的甲基化情况。