《表1 引物序列：MiR-204-3p靶向EphB2调控非小细胞肺癌的作用机制》

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《MiR-204-3p靶向EphB2调控非小细胞肺癌的作用机制》

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PCR细胞转染24 h后，收集细胞，冷PBS清洗细胞1次，由Trizol提取各组组织中总RNA。根据Taq Man Micro RNA Assays Reverse Transcription primer（4427975，Applied Biosystems，USA）的说明进行转录以产生c DNA，取2μL c DNA稀释至50 ng/μL，PCR扩增体系是20μL。逆转录反应条件：37℃反应30 min，85℃反应5 s。mi R-204-3p、U6、Eph B2、GAPDH的引物由北京擎科生物科技有限公司进行合成（表1）。使用定量PCR仪进行实时定量PCR。反应条件是在预变性95℃反应10 min，变性95℃反应10 s，退火60℃反应20 s，35个循环。PCR体系为20μL:q PCR正向引物（10μmol/L）0.8μL，q PCR反向引物（10μmol/L)0.8μL，ROX参考染料Ⅱ0.4μL，SYBRPremix Ex TaqTMⅡ10μL，c DNA模板2.0μL，灭菌蒸馏水6.0μL。其中mi R-204-3p的相对表达以U6作为内参，Eph B2 m RNA相对表达以GAPDH的表达作为内参。2-ΔΔCt表示目的基因相对表达水平，公式如下：ΔΔCT=ΔCt实验组-ΔCtGAPDH，其中ΔCt=Ct目的基因-Ct内参。其中Ct表示q PCR的扩增循环数。