《表1 引物序列：不明原因复发性流产患者蜕膜组织中MMPs/TIMPs表达及启动区甲基化水平分析》

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《不明原因复发性流产患者蜕膜组织中MMPs/TIMPs表达及启动区甲基化水平分析》

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3.实时定量PCR:（1）总RNA提取：取50 mg组织按照产品说明进行总RNA提取。采用ND2000分光光度计测定RNA浓度以及A260/A280，比例在1.9～2.1之间说明RNA纯度较好，可行后续实验；（2）cDNA合成：按照产品说明进行cDNA合成。吸取1 ul/2 ul（1 ug/ul）总RNA为模板，反转录合成cDNA；(3）实时定量PCR：根据实时定量PCR试剂盒说明配制反应体系，反应总体系为20 ul:SYBR Green 10 ul，PCR特异上、下游引物按1∶1混合后取1.5 ul，cDNA模板1.5 ul，灭菌蒸馏水7 ul。扩增条件：95℃3 min；95℃15s，60℃30s，72℃30s，35个cycle；72℃2 min。以GAPDH为内参，进行PCR反应，引物序列来自Primerbank，引物序列详见表1。每次检测设定3个复孔，每个样本重复3次。以上在每个PCR循环的延伸期采集荧光信号，PCR反应完成后利用温度梯度变性获得溶解曲线供PCR产物定性分析。根据PCR扩增曲线，得到每个样本的循环周期数（Cq值），使用2-△△Ct法计算各组中目的基因的表达水平情况。