《表1 引物Tab.1 Primers》

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《表达异源木糖异构酶对谷氨酸棒杆菌利用木糖的影响》


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根据GenBank中大肠杆菌MG1655、枯草芽胞杆菌168和野油菜黄单胞菌ATCC33913的木糖异构酶编码基因xyl A序列分别设计特异性引物,以各自基因组DNA为模板,扩增xylA基因片段,回收纯化PCR产物.双酶切(酶切位点见表1)将pXMJ19质粒线性化,利用Clon Express?ⅡOne Step Cloning Kit(Vazyme)同源重组的方法分别连接4个xylA基因片段和线性化质粒片段,获得过表达质粒pXMJ19-xylAeco、pXMJ19-xyl Absu、pXMJ19-xyl Axcc1和pXMJ19-xylAxcc2.采用类似方法构建pXMJ19-SDGDH-xyl Aeco质粒,通过上游引物引入谷氨酸脱氢酶启动子的Shine-Dalgarno(SD)及周边序列.通过电转化方法将这些过表达质粒转入谷氨酸棒杆菌ATCC13032感受态细胞中,得到相应菌株.