《表1 引物及其序列Tab.1 Primers and their sequences》

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《三丁基锡抑制雌性斑马鱼卵子发生》

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用在线引物设计软件（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/）设计目的基因cyp19a1a，cyp17a1，cyp17a2，20β-hsd，fshr，lhr，mprα和mprβ和管家基因ef1α的定量PCR引物，引物信息如表1所示。定量PCR反应包含0.3μmol·L-1引物，1×Sybr Green master mix（TaKaRa），2μL cDNA，反应体积为20μL。定量PCR反应参数为:95℃预变性30s；95℃变性5s，40个循环；60℃退火30s；72℃延伸10s。反应时，同时做阴性对照并检测熔解曲线，以保证每个样品中仅有1个PCR产物，且cDNA未受污染。在实验前，本研究已确认ef1α基因的表达不受所用药物影响。随后，用qRT-PCR的方法检测上述基因的相对表达水平变化。本研究所用引物的扩增效率总体相似，约为96.3%~105.1%。目的基因与ef1α基因的相对表达量用2-ΔΔCt的方法进行计算[11]。