《表1 10对引物的序列和退火温度Tab.1 Sequences and annealing temperatures of10 pairs of primers》

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《广西野生鲤与建鲤的遗传多样性分析》

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（1） 选取广西本地鲤（H1号）和建鲤（H2号）各30尾鱼，抽取尾部静脉血样30μL/尾，置于1m L的EP管加入ACD抗凝溶液摇匀，血液基因组DNA提取试剂盒抽提DNA，纯化后的DNA保存液用琼脂糖凝胶电泳测定完整性，稀释至50 ng/μL备用。微卫星引物为中国水产科学研究院黑龙江水产研究所开发的镜鲤微卫星标记的引物，详见表1。（2）使用TAKARA Mighty AmpDNA Polymerase Ver.2（R071Q）进行PCR扩增，反应体系如下:25μL 2×Mighty Amp Buffer Ver.2、1μL Primer F 10μmol/L、1μL Primer R 10μmol/L、1μL Mighty Amp、DNA Polymerase、1μL DNA、21μL dd H2O。PCR反应程序为94℃预变性4 min，94℃变性30 s，退火30 s，72℃延伸30 s，30个循环，最后72℃延伸5 min。（3）PCR扩增产物经8.0%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后，硝酸银染色，用混合显色液显色，系统成像仪拍照。（4）根据50 bp DNA Step ladder分子标记的清晰条带和鲤PCR扩增片段大小，分析各位点的等位基因。