《表1 RALFs引物：拟南芥RALF多肽家族的功能多样性初步分析》

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《拟南芥RALF多肽家族的功能多样性初步分析》

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本研究中所选的表达载体为pET-32a，首先利用Primer 5.0软件设计特异性引物，以野生型拟南芥cDNA为模板，进行PCR克隆扩增，获得目的基因片段，设计的引物见表1。PCR程序为95℃3 min；95℃15 s，58℃15 s，72℃40 s，共36个循环；72℃5 min，22℃∞。然后进行琼脂糖凝胶电泳回收目的条带，以Bam H I和Eco R I为酶切位点，对扩增产物和载体进行双酶切（37℃，2 h）。然后用T4连接酶4℃连接12 h后进行热激转化（42℃，90 s），涂布于含有氨苄霉素（Amp+）抗性的LB固体培养基上，37℃培养12 h，然后挑取单菌落进行菌落PCR检测，挑取阳性菌落进行摇菌（37℃，12 h），提取质粒并测序。