《表1 PCR扩增的引物序列》

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《甘蓝冷胁迫相关基因BobHLH18克隆与表达分析》

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根据克隆到的BobHLH18基因全长cDNA序列设计一对特异引物T3和T4（表1），利用Light Cycler Roche 480定量PCR仪检测4℃低温处理下甘蓝不同器官及不同处理时间下目的基因的表达特征，以甘蓝β-actin基因（引物为T5和T6）作为荧光定量PCR的内标。定量PCR反应总体系为20μl，包括SYBRPremix Ex TaqTMII（TaKaRa）10μl，特异引物各1μl，cDNA模板1μl，加双蒸水到7μl，在Light Cycler Roche 480上采用Light Cycler System进行实时定量PCR反应，反应参数:95℃3 min；95℃10 s，60℃20 s，72℃10 s，40个循环，每个循环结束时采集荧光信号。试验结果采用2-△△Ct方法来计算基因相对表达量。