《表2 zy103基因定位标记及候选基因LOC＿Os12g36890.1测序引物》

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《水稻窄叶突变体zy103突变基因鉴定》

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次年，从zy103/9311的F2群体中选择标记RM519和RM28448的染色体区间呈杂合的正常表型单株，自交获得F3群体。共种植F3群体8 500株，其中正常表型单株6 412株，窄卷叶突变表型单株2 088株，也呈孟德尔的3∶1理论分离比例（χ2=0.86<χ20.05，1=3.84，P=0.35>0.05），进一步证实此窄卷叶突变性状由一对隐性单基因控制。在连锁标记RM519和RM28448的染色体区域附近设计了32对STS标记和24对Indel标记，其中7对（标记引物详见表2）在亲本和基因池间存在多态性。应用上述多态性标记对2 088株窄卷叶突变表型单株进行标记基因型检测和连锁分析，最终将突变基因zy103定位于STS标记zy-7和zy-21之间约195.4 kb的染色体区段内（图4-A）；zy103的候选基因Os CSLD4包括2个外显子和1个内含子，外显子上8个膜结构域（第1个跨膜结构域被内含子隔开），中心结构域D＿D＿D＿QxxRW位于第2外显子上，编码1个由1 215个氨基酸组成的类纤维素合酶Os CSLD4（图4-B）；变体中Os CSLD4基因的编码区第2外显子第3 472～第3 479处有8个核苷酸（TGTGCCAC）缺失，造成移码突变（图4-C）；对水稻Os CSLD蛋白第7和第8跨膜结构域的氨基酸序列进行比对发现，突变体中原编码蛋白第Ⅶ和第Ⅷ跨膜区保守功能结构域丢失（图4-D）。