《表1 本研究hi TAIL-PCR引物》
备注:RB:右翼序列扩增引物,LB:左翼序列扩增引物
以上述筛选出的突变体为目标菌株进行基因组总DNA提取,突变体T-DNA插入位点左右的侧翼序列扩增采用hi TAIL-PCR方法[23]。L(R)B2不添加5’端接头。在一级反应中,使用的模板是突变体菌株的基因组总DNA,在二级和三级反应中,使用模板则分别为上一级反应产物稀释1000倍。产物在1.5%琼脂糖凝胶中电泳,以1 kb Maker为参照,将PCR特异性产物经回收、连接、大肠杆菌转化,菌落PCR检测和华大基因测序后得到的侧翼序列进行NCBI Blastx在线分析,使用Bio Edit软件结合G enbank Valsa mali03-8基因组序列进行本地分析[4],获得两端侧翼序列全长。引物序列见表1,反应程序见[24]。
图表编号 | XD00224862700 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.10.01 |
作者 | 王怡霖、赵涛、孙庚午、刁雨菲、冯军利、于涛、何邦令、刘会香 |
绘制单位 | 山东农业大学植物保护学院、山东省林业有害生物防控工程技术研究中心、泰安市徂徕山林场、山东农业大学植物保护学院、山东省林业有害生物防控工程技术研究中心、山东农业大学植物保护学院、山东省林业有害生物防控工程技术研究中心、泰安市徂徕山林场、淄博市淄川林业局、山东农业大学植物保护学院、山东省林业有害生物防控工程技术研究中心、山东农业大学植物保护学院、山东省林业有害生物防控工程技术研究中心 |
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