《表1 Tail-PCR分离肾蕨LFY基因全长和启动子的引物名及序列》

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《肾蕨LEAFY基因和启动子的克隆及序列分析》

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注:在引物序列中R:G/A；S:C/G；M:C/A；W:A/T；Y:C/T；D:A/T/G

提取的肾蕨叶片总RNA，用全式金试剂盒合成第一条链cDNA用于后续实验。用已经克隆出的肾蕨LFY同源基因的中间片段，设计3'片段特异引物（表1）根据后续设计的引物，以肾蕨cDNA为模板，采用RACE技术克隆3端。提取肾蕨总DNA作为模板，设计3个5端下游引物，顺次与8个随机引物AD1～AD8（白琼等，2014）组合进行Tail-PCR扩增，扩增5端。用引物K.PT.5F1和K.PT.5R1X，分别以肾蕨cDNA和总DNA为模板进行PCR，扩增肾蕨LFY基因cDNA全长和DNA全长。