《表1 RSV全长基因组扩增和序列测定引物Tab.1Primers used for amplification of genomic fragments》

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《人呼吸道合胞病毒兰州株基因组全长cDNA克隆的构建及鉴定》

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按照RNeasy Mini Kit（Qiagen）操作说明书提取病毒RNA。以病毒RNA为模板，以设计的正向引物为反转录引物，用反转录酶Superscript III（Invitrogen）进行反转录，获得cDNA。以cDNA为模板，用特异性引物（F1～F4，见表1）和EasyA Taq扩增PCR片段。根据引物的熔解温度以及目的片段的长度确定引物的退火温度和延长时间。PCR条件设定为:94℃、30 s；52℃、30 s；72℃、1～3 min，共30个循环；72℃延伸10 min。PCR扩增结束后，取5μL PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。