《表1 qRT-PCR反应引物设计》

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《钾肥对水稻籽粒碳氮代谢相关酶基因表达的影响》

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取-80℃冰柜中保存籽粒，采用Trizol法提取总RNA，用脱氧核糖核酸酶DNaseⅠ消除基因组DNA污染后，采用反转录试剂盒（NOVA，购自江苏愚公生命科技有限公司）合成cDNA。使用NCBI（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）已公布基因DNA序列，Premier 5.0软件设计qRT-PCR引物（见表1）。以cDNA为模板，Actin1为内参基因，参照Taq SYBR?Green qPCR试剂盒作qRT-PCR，每个样品重复3次。采用实时荧光定量法测定基因转录表达量，参照Delte-DelteCt法分析基因相对转录表达量[8]，(1）ΔCt=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）；（2）ΔΔCt=ΔCt（试验组）-ΔCt（对照组）；（3）基因表达量=2-ΔΔCt。