《表1 qRT-PCR引物》

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《黑咖啡提取物对人皮肤成纤维细胞胶原蛋白及衰老相关基因的影响》

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收集HSF细胞，以5×104个/mL密度接种于6孔板中，置培养箱中培养6 h，待细胞完全贴壁后加入CCK-8筛选出的细胞安全剂量浓度黑咖啡冻干粉稀释液，另设空白对照组，每组设3个平行复孔，培养24 h。然后用Trizol裂解细胞并提取细胞总RNA，取RNA水溶液各2μL滴在浓度测定板（NanoQuant plate）上，用酶标仪检测RNA浓度及纯度。建立20μL的qRT-PCR反应体系，PCR扩增条件为:预变性95℃、15 min；变性95℃、15 s，退火60℃、30 s，延伸72℃、20 s，反应循环40次。72℃、10 min终止反应。熔解曲线反应条件为:95℃1 min，55℃30 s，每上升5℃采集一次荧光信号。引物由华大基因公司完成设计与合成，以GAPDH为内参，引物序列信息见表1。