《表1 qRT-PCR引物》

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《秋水仙碱诱导杉木胚珠基因的表达变化》

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参照Trizol试剂说明书，分别提取秋水仙碱处理和对照的杉木大孢子叶球的RNA，用PrimeScriptTMRT Reagent Kit（Perfect Real Time）（Ta KaRa，大连）反转录合成cDNA。在与纺锤丝、动粒、DNA复制以及细胞周期相关的3个类别中各随机挑选1～2个基因进行表达验证。以Primer Premier5.0软件设计qRT-PCR引物（表1），以肌动蛋白基因（Cunninghamia lanceolata Actin 1，ClACT1）作为内参基因。PCR反应体系（10μL）为:SYBR premix Ex TaqⅡ5μL，上下游引物（10μmol/L）各0.2μL，cDNA 0.8μL，ddH2O（无RNase）3.8μL。PCR反应程序采用两步法标准程序:95℃5 min；95℃5 s，60℃20 s，72℃20 s，40个循环。