《表1 qRT-PCR引物》

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《家蚕AGO1蛋白结合RNA的分离与鉴定》

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设计已知的3个潜在miRNA靶基因BmEm4、Bm (spl）-like和BmEmc的qRT-PCR引物，同时设计内参基因β-Actin的qRT-PCR引物，引物序列见表1。使用Roche公司的SYBR Green Realtime PCR试剂按使用说明进行qRT-PCR鉴定。qRT-PCR扩增程序为：95℃10 min；98℃15 s，60℃45 s，共40个循环。熔解曲线分析程序为：95℃15 s；65℃30 s；95℃15 s。检测样品包括BmAGO1免疫共沉淀RNA、对照组RNA和细胞总RNA，使用2-△△CT方法分析目的基因在BmAGO1免疫共沉淀RNA的富集度差异[△CT=CT目的基因-CT内参基因，△△CT=△CT-△CT最大值（细胞总RNA样品）]，计算出抗体免疫共沉淀后RNA的富集倍数[18-19]。