《表1 qRT-PCR定量引物设计》

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《毛竹APX家族基因鉴定和表达分析》


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使用Prime Primer 5.0软件设计定量引物,采用NCBI的Primer BLAST程序验证引物的特异性,内参引物为液泡膜内嵌蛋白41基因(TIP41)[25],引物由上海生工生物有限公司合成(表1)。qRT-PCR反应体系为2×SYBR PCR mix 5μL,上、下游引物(10 mmol/L)各0.2μL,cDNA模板0.8μL,ddH2O3.8μL,总体系为10μL。q RT-PCR反应程序为:94℃1 min;94℃10 s,62℃10 s,72℃10 s,45个循环。3次重复,4个技术重复,在qTOWER 2.2(Analytik Jena,Germany)实时定量PCR仪上进行定量分析,并用2–△△CT对结果进行分析[26]。