《表1 Sb SEC14基因克隆与表达所用引物》

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《甜菜磷脂酰肌醇转运蛋白基因SbSEC14的克隆及低温胁迫下的表达分析》

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使用Fast King g DNA Dispelling RT Super Mix反转录试剂盒将总RNA反转录成c DNA。应用Primer 5.0软件设计甜菜Sb SEC14基因的PCR扩增引物（表1）。PCR扩增体系总体积为50μL，Prime STAR Max Premix（2×） 25μL、上下游引物各1.0μL、c DNA模板1.0μL （92 ng/μL）、dd H2O 22μL。PCR程序为变性98℃10 s，退火58℃5 s，延伸72℃30 s，35个循环。PCR产物取25μL点样，用1.5%的琼脂糖凝胶180V电泳40 min，凝胶成像仪拍照、切胶并收目的片段，回收产物连接到p MD-19T载体，转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中，在含有氨苄青霉素的LB平板上进行阳性克隆筛选并挑取单菌落鉴定，随后送上海生工测序，并通过Bio Edit软件比对测序结果的正确性。