《表1 q RT-PCR引物序列》

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《BTK抑制剂GDC-0853通过TLR4/NF-κB通路抑制M1巨噬细胞极化并改善UUO肾损伤》

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使用RNAiso Plus试剂说明提取各组巨噬细胞RNA，采用Nano Drop2000紫外分光光度计检测RNA的纯度及浓度。按照One Step SYBR?Prime Script?RT-PCR Kit试剂盒说明书进行逆转录合成c DNA，根据SYBR Premix Ex TaqⅡ试剂盒说明书检测TNF-α、IL-6、IL-23、i NOS m RNA水平，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）作为内参。扩增体系包括：上游引物（10μmol/L)1μl、下游引物（10μmol/L)1μl、c DNA 2μl、SYBR Premix Ex TaqⅡ12.5μl、RNase Free d H2O 8.5μl。反应条件：95℃预变性3 min，95℃变性20 s，60℃退火15 s，72℃延伸45 s，循环40次，实验重复3次。引物由上海生工生物有限公司合成，使用的具体引物序列见表1。采用2-ΔΔCt法计算各基因m RNA相对表达量。