《表1 本实验中所用的引物》

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《小黑杨PsnHB13基因在烟草中的遗传转化与功能分析》

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注:下划线:限制性内切酶酶切位点

参照Ta KaRa公司RNA提取试剂盒说明书，提取小黑杨叶片的总RNA。利用Nanodrop 2000分光光度计检测RNA的纯度和浓度，取0.5μg RNA为材料，利用Prime ScriptTMRT reagent Kit试剂盒反转录合成第一链c DNA。根据转录组数据，设计小黑杨Psn HB13基因特异性引物扩增目的片段，所用引物见表1。PCR反应体系为模板2μL，引物Psn HB13-XbaⅠ-F 1μL、Psn HB13-KpnⅠ-R 1μL、10×Buffer 2.5μL、Ex Taq 0.25μL、d NTP 2μL，用dd H2O补足至25μL，反应条件为94℃5min，94℃30 s，56℃30 s，72℃1 min，35个循环；72℃7 min。反应结束后取25μL PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，选取条带大小正确的进行胶回收。