《表2 定量PCR引物：褐飞虱安全高效RNAi靶基因的筛选及Snf7同源基因的控害效果》

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《褐飞虱安全高效RNAi靶基因的筛选及Snf7同源基因的控害效果》

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褐飞虱龄期和组织模板的收集、褐飞虱和亚洲玉米螟总RNA的提取及c DNA的合成均见文献[8]。利用primer5.0软件设计q-PCR的特异性引物，内参基因选取β-Actin（表2）。以反转录得到的褐飞虱各个时期和各个组织c DNA为模板，利用KAPA SYBR?FAST q PCR Master Mix试剂盒进行荧光定量PCR。其反应体系为：KAPA SYBR FAST q PCR Master Mix (2×）16.5μL，c DNA模板1μL，q-PCR上下游引物各0.7μL，dd H2O 14.1μL，总体系为33μL。将上述反应液分装到3个孔中，每孔10μL。q-PCR反应程序：95℃预变性3 min，然后95℃变性3 s，60℃退火20 s，40个循环。反应结束后确认q-PCR的扩增曲线和融解曲线。定量数据由Light Cycler480仪器自带的软件分析导出，导出数据为Ct值。Ct值表示每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。