《表1 小黄鱼神经肽FF基因荧光定量引物》

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《神经肽FF在小黄鱼(Larimichthys polyactis)性腺发育早期的表达与定位分析》

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采用M-MLVRTase c DNA Synthesis Kit反转录试剂盒合成c DNA第一条链，–20°C冰箱备用。选取小黄鱼β-actin、18S基因作为内参，通过实时荧光定量PCR（q RT-PCR）分析小黄鱼神经肽FF基因在不同组织中表达的差异性。根据所得神经肽FF基因c DNA全长，设计其q RT-PCR特异性引物，引物序列见表1。选择第Ⅱ期性未成熟的小黄鱼三只做3次生物学重复，每次反应做3次机械重复。q RT-PCR实验操作参考SYBR Premix Ex Taq II （Tli RNase H Plus）试剂说明书进行。q RT-PCR结果以2–ΔΔCT方法换算成相对表达量，单因素方差分析分析（One-way ANOVA）运用软件SPSS 17.0来实现，显著性差异分析则通过SPSS17.0的Duncan法得出，P<0.05为显著差异；利用Origin 8.1软件进行柱状图绘图。