《表1 Kif5b实验组和Kif5b对照组质粒构建引物(5'-3')》

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《驱动蛋白Kif5b对人脐静脉内皮细胞血管形成的作用》

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实验分为Kif5b实验组和Kif5b对照组2组，Kif5b实验组是基于p LL3.7质粒和靶向降解Kif5b基因m RNA的小发夹RNA（small hairpin RNA，sh RNA）为基础构建的Kif5b敲减HUVECs组，Kif5b对照组是基于p LL3.7质粒和阴性对照sh RNA为基础构建的HUVECs阴性对照组。Kif5b实验组质粒构建，首先以人Kif5b编码区基因序列（Gen Bank序列号为NM＿004521.2）为模板设计sh RNA以及阴性对照sh R-NA（表1，斜体示sh RNA序列）。分别以p LL3.7空质粒为模板，表1序列为引物进行聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）反应，纯化PCR产物和p LL3.7空质粒进行酶切连接，电转E.coli DH5α感受态细胞后37℃过夜培养，获得的阳性克隆经PCR验证后分别命名为Kif5b实验组质粒和Kif5b对照组质粒分别用于Kif5b敲减和对照。随后分别提取Kif5b实验组质粒、Kif5b对照组质粒和p LL3.7载体慢病毒系统助手质粒（p VSVG、p Gag和p Rev）。