《表1 引物序列：绿原酸通过影响自噬及耐药蛋白表达逆转5-氟尿嘧啶结肠癌细胞的耐药性》

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《绿原酸通过影响自噬及耐药蛋白表达逆转5-氟尿嘧啶结肠癌细胞的耐药性》

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检测Ch A对HCT116-R细胞系中自噬、耐药相关基因的影响将对数生长期细胞接种于6孔板进行实验，待细胞贴壁生长24 h后，采用100、400 mg/L剂量Ch A干预细胞48 h后，收集细胞加入Trizol提取细胞总RNA，并对核酸进行浓度及纯度法测定。吸去1μg总RNA逆转录c DNA，程序设定为30℃（10 min）→42℃（50 min）→85℃（10 min）→4℃（5 min）。根据试剂说明书，RT-PCR体系为20μL，c DNA 2μL，引物4μL，2×Fast Fire q PCR Pre Mix10μL dd H2O 4μL。扩增条件设置为：94℃（10 min)，94℃（15 s)，60℃（1 min），循环40次。以β-actin作为内参，基因引物序列见表1。