《表3 安全等级划分表:lncRNA XIST-miR137-ATG5调节细胞自噬功能在肠癌细胞5-氟胞嘧啶耐药性中的作用》

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《lncRNA XIST-miR137-ATG5调节细胞自噬功能在肠癌细胞5-氟胞嘧啶耐药性中的作用》


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肠癌细胞FHC,HCT116,HT29,SW480,SW620,Ls174t,DLD-1或转染24 h后的各组细胞,即处理组(si-XIST或mi R-137 mimics)和阴性对照组(si-NC或mimics NC)采用TRIzol进行细胞裂解,抽提总RNA,采用Prime ScriptTMRT reagent Kit with g DNA Eraser (Perfect Real Time)试剂盒进行逆转录实验,获得各样品c DNA。将c DNA稀释10倍后作为模板,b-actin或U6为内参,按照TB Green誖Premix Ex TaqTM(TIi RNase H Plus)试剂盒说明书提供的方法在ABI 7900实时荧光定量PCR仪进行q PCR检测。q PCR引物见表3。q PCR反应条件为:第一步,95℃30s;第二步,95℃5 s、60℃30 s,40个循环。实时荧光定量PCR的结果以2-△△Ct表示目的基因RNA的相对表达水平,△△Ct=[处理组Ct靶基因-处理组Ctb-actin]-[阴性对照组Ct靶基因-阴性对照组Ctb-actin]。设阈值2-△△Ct>1.5时提示为高表达。