《表1 本研究所用引物：VirAB在单核细胞增生李斯特菌耐药性及生物被膜形成中的作用》

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《VirAB在单核细胞增生李斯特菌耐药性及生物被膜形成中的作用》

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注：斜体部分序列表示保护碱基；下划线部分表示酶切位点

利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取Lm野生株EGD-e的基因组，以EGD-e基因组DNA为模板分别扩增vir A、vir B和vir AB的上游和下游同源臂，引物序列见表1。利用重叠延伸PCR （Splicing by Overlap Extension PCR，SOE-PCR）[10]技术分别融合3个基因的上、下游同源臂，融合得到的长片段依次经切胶回收、双酶切及纯化后，与穿梭质粒p MAD[11]进行连接反应。利用热激法将构建完成的重组质粒转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，筛选阳性转化株并送至南京金斯瑞生物科技有限公司进行测序。