《表1.本试验所用引物：单增李斯特菌溶血素O的PEST序列激活ERK1/2磷酸化的作用》

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《单增李斯特菌溶血素O的PEST序列激活ERK1/2磷酸化的作用》

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将测序结果正确的重组质粒及突变质粒转入大肠杆菌Rosetta感受态细胞中，于LB培养基中37°C培养至OD600为0.6，加入IPTG 16°C诱导12 h使其大量表达目的蛋白，离心收集菌体并重悬于50 mmol/L PBS缓冲液，对其迚行超声破碎。破碎后溶液离心收集上清并与镍柱4°C结合6 h。使用30 mmol/L咪唑洗脱杂蛋白和300 mmol/L咪唑收集目的蛋白。BCA试剂盒测定纯化的蛋白浓度后，迚行SDS-PAGE验证。用同样的斱法表达纯化LLO重组蛋白。最后将纯化的蛋白用半透膜透析后适当浓缩，使用酶标仪检测其浓度，用0.22μmol/L滤器过滤除菌并置于4°C待用。