《表1 本研究引物：单增李斯特菌srtA基因缺失株的构建及srtA基因对其毒力的影响研究》

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《单增李斯特菌srtA基因缺失株的构建及srtA基因对其毒力的影响研究》

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注:斜体字母表示保护性碱基，下划线字母为PstⅠ和Bam HⅠ的酶切位点；扩增分离株和缺失株的目的片段大小分别为1747 bp和1078 bp Note:Italic letters indicate protective nucleotide，underlined letters indicate PstⅠand Bam HⅠ，respectively.The detecting fragment siz

根据文献[18]中的煮沸法提取LM分离株LM90SB2的基因组。实验中所需要的引物见表1。引物srtA F/srtA R扩增包含srtA基因及其上下游同源臂序列，PCR的反应体系：Taq DNA聚合酶（5 U/μL) 1μL，dNTP（25 mmol/L）1μL，10×Buffer 3μL，上下游引物（10μmol/L）各1μL，模板1μL，ddH2O补足30μL。反应条件：95℃预变性5 min，95℃变性40 s、60℃退火30 s、72℃延伸100 s，30个循环，72℃延伸10 min，4℃保存。琼脂糖凝胶电泳检测目的基因，回收目的片段，连接到pMD19-T (simple）载体，转化到DH5α感受态细胞，送北京华大基因公司测序。测序结果与NCBI上已公布LM标准株的全基因序列进行比对分析。