《表1 引物序列：srtA基因调节变异链球菌氧化耐受的机制研究》

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《srtA基因调节变异链球菌氧化耐受的机制研究》

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将UA159和ΔsrtA对数中期菌液1∶20稀释于含有1%蔗糖的BHI培养基中，分别培养至对数中期、稳定期后，离心收菌，提取细菌总RNA，然后使用PrimeScript RT reagent Kit With gDNA Eraser逆转录为cDNA。选用16S rRNA[10]作为内参引物，选用RNA-seq结果中FDR<0.05、|FC|≥2的DEGs作为目的基因。本研究所用引物序列见表1，其中lrgB、lytT引物序列参考Ahn等[11]的研究设计，其余引物序列使用Primer 3 Plus设计。根据TB GreenTMPremix Ex TaqTMII(Tli RNase H Plus）说明书加样，各基因引物设置不含cDNA的阴性对照。通过LightCycler480IISystem程序上机扩增，获得各目的基因及内参基因的CT(cycle threshold）值。采用2-ΔΔCT法对目的基因的相对表达水平进行计算分析，得到各目的基因差异表达情况。