《表1 引物序列：石榴皮原花青素对变异链球菌生物膜形成及相关毒力基因表达的影响》

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《石榴皮原花青素对变异链球菌生物膜形成及相关毒力基因表达的影响》

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利用NCBI Primer-BLAST设计最优引物（见表1）。PCR反应体系为25μl:2×Taq PCR Mastermix12.5μl，上下游引物各0.5μl，DNA模板1μl，dd H2O补足25μl反应体积。PCR反应条件为:94℃预变性5 min；94℃变性30 s，61℃退火30 s，30个循环。real-time PCR扩增完成后分析熔解曲线。如果Ct值≤35则判定为阳性，Ct值>35或无Ct值判定为阴性。每个样品均设毒力基因检测管与内参基因检测管，采用2-ΔΔCt对样本进行相对定量。