《表1 单增李斯特菌血清分型引物》

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《新疆食源性单增李斯特菌监测及血清型分析》


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单增李斯特菌的血清分型参照Doumith等[7]建立的多重PCR的方法进行。细菌DNA提取按照试剂盒说明书进行;血清分型引物见表1;多重PCR扩增体系(50μL):2×Taq Master Mix 25μL,lmo0737、orf2819、orf2110的上下游引物(10μmol/L)各1μL,lmo1118引物(10μmol/L) 1.5μL,prs引物(10μmol/L) 0.5μL,DNA模板2μL,灭菌水补齐至50μL;扩增条件:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,53℃退火69 s,72℃延伸,35个循环;72℃延伸7 min[8]。用2%的琼脂糖胶块对PCR产物对进行电泳,溴化乙锭(Et Br,EB)染色,用Gel Doc EZ获取图像,对条带进行分析,判断血清型,并且与按照单增李斯特菌诊断血清试剂盒说明操作,进行血清型对比。