《表2 引物的序列：miR-17-92簇的表达与小儿急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药的相关性研究》

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《miR-17-92簇的表达与小儿急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药的相关性研究》

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采用第一链cDNA合成法将上述总RNA进行逆转录。取1μg总RNA，依次加入4μL i Script Reaction Mix（5×），1μL i Script Reverse Transcriptase，用RNA-free水补至20μL。充分混匀后用PCR仪逆转录。逆转录程序:25℃5 min，46℃20 min，95℃1 min，4℃for ever。以逆转录后的cDNA为模板，采用SYBR Green染料法进行PCR扩增。所有miRNA（miR-17、18a、19a、19b、20a和92a）和U6 snR-NA（以下简称U6）的PCR引物均由四川擎科生物有限公司合成，引物序列见表2。取1μL cDNA，加入i QTM SYBR Green supermix（2×）5μL，上下游引物各0.5μL，用RNA-free水补至10μL，充分混匀后转移至八连管中，每组设3个复孔，短暂离心后放入qRT-PCR仪进行扩增。反应程序:95℃3 min，95℃15 s，55℃60 s，38个循环。以U6作为内参，对CEM-C1和CEM-C7细胞中miR-17-92基因簇中各miRNA进行实时荧光定量分析。得到模板的Ct值，由公式2-ΔΔCt计算其相对表达量（图2），以miR-17为例，ΔΔCt=（CtmiR-17-CtU6）CEM-C7组-（CtmiR-17-CtU6）CEM-C1组。结果表明:与CEM-C7细胞比较，CEM-C1中miR-19 a、miR-20 a和miR-9 2 a高表达（P<0.01），miR-17、miR-18a和miR-19b的表达均无显著性差异（P>0.05）。