《表2 q RT-PCR引物序列》

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《番茄蛋白酶抑制剂基因SLPI100的克隆、表达与生物信息学分析》

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从5叶期的健康番茄幼苗的根、茎和叶片分别提取RNA，反转录后，采用TB Green TM Premix Ex TaqTMⅡ（Tli RNase H Plus）试剂盒进行SYBR探针法q RT-PCR，分析SLPI100在不同组织中的表达水平。使用番茄Actin（登录号:U60478.1)作为内参基因进行q RT-PCR分析实验。上下游引物由北京华大公司合成（表2）。q RT-PCR反应体系如下：TB Green Premix Ex TaqⅡ（Tli RNase H Plus）10μL，PCR Forward Primer(10μmol/L） 0.8μL，PCR Reverse Primer （10μmol/L）0.8μL，ROX Reference DyeⅡ0.4μL，cD NA 2μL，ddH2O 6μL。反应条件为：预变性95℃30 s；PCR反应95℃5 s，60℃34 s，共40个循环。溶解曲线温度区间为50℃～95℃，每30 s升高0.5℃；并在升温后进行荧光采集，设置在每个循环延伸结束之后。每对引物和模板组合在同一次反应中都设置3次独立重复，选用3株进行生物学重复，采用2-ΔΔCt法计算基因的相对表达量，使用SPSS软件对结果进行单因素方差分析。