《表1 实时qRT-PCR引物序列》

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《2对同卵双生子microRNAs表达谱差异分析》

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注:RT引物3&apos；端下划线部分为与靶miRNA 3&apos；端互补的序列Note:Underlined letters at the 3&apos；end of the RT primers represent the complementary sequences to the 3&apos；end of the target miRNA

根据芯片检测结果，挑选miR-92b、miR-520d-5p、miR-22*和miR-338-3p 4个miRNAs采用实时定量RT-PCR（qRT-PCR）进行验证。c DNA逆转录反应采用20μL反应体系，内含20n M stem-loop RT引物、1×RT buffer（Epicentre）、0.125mmol/L d NTPs（Ta KaRa）、20U MultiS cribe reverse transcriptase（Epicentre）、12U RNase Inhibitor（Epicentre）和500ng总RNA。反应条件为16℃30min，42℃40min，然后85℃5min。实时定量PCR反应体积25μL，内含1×PCR buffer（Promega）、1.5mmol/L Mg Cl2（Promega）、0.25mmol/L d NTPs（Ta KaRa）、1U DNA polymerase（Promega）、0.4μmol/L特异性引物、0.25×SYBRGreen I（Invitrogen）和1μL c DNA。热循环参数为95℃预变性5min，然后95℃15s，60℃1min，共40个循环。以U6小核RNA为内参基因进行校正和标化。每个反应重复3次。本实验所用引物参照Chen等[17]介绍的方法设计，具体序列见表1。