《表3 基因表达检测引物信息》

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《转录因子KLF7对IL-6基因的转录调控分析》

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采用6孔板培养3T3-L1前脂肪细胞，待细胞汇合度达50%时，用LipofectamineTM2000转染试剂，50 mol·L-1小干扰RNA片段（si-KLF7-1和siKLF7-2）以及阴性对照si-NC分别转染3T3-L1前脂肪细胞，转染6 h后换为添加10%胎牛血清DMEM培养基，转染至24、36和48 h时，PBS洗涤2遍，按照全式金Trans Zol Up试剂裂解细胞，提取总RNA。使用分光光度计（Eppendorf，Hamburg，Germany）测定所得总RNA OD值，OD260/280在1.8～2.0即为合格。反转录参照反转录试剂盒Primer ScriptTMRT reagent Kit with g DNA Eraser（Perfect Real Time）说明书操作，得到反转录c DNA。利用FastStart Universal SYBR Green Master(Rox）试剂盒，反转录体系为：上、下游引物各0.2μL，模板1μL，Fast Start Universal SYBR Green Master (Rox）5μL，dd H2O 3.6μL。使用7500 Real-Time PCR System(ABI，Carlsbad，CA，USA）平台，PCR反应条件：95℃预变性10 min；95℃变性15 s；60℃复性延伸60 s，共40个循环，每个样品设3孔重复，设置检测m RNA表达。以HPRT1基因作内参基因，获得数据作为Ct值，ΔCt=Ct目的基因-CtHPRT1，利用2-ΔΔCt计算目的基因相对表达量。Primer Premier 5.0软件设计表达检测引物，由金唯智公司合成（见表3）。