《表1 引物信息：牛QPCT基因为母源等位基因表达的印记基因》

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《牛QPCT基因为母源等位基因表达的印记基因》

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印记基因表现为单等位基因表达，为确定基因的表达状态，首先需要在基因的编码序列上寻找SNP位点用于区分等位基因。本研究采用对PCR产物直接测序的方法寻找SNP，如果测序峰图中存在双峰，即可确定存在SNP杂合位点。鉴定的杂合子用于等位基因表达分析。利用DNA提取试剂盒（生工生物工程公司上海），分别提取32头成年牛和15个胎盘样品的基因组DNA （genomic DNA，gDNA）。通过NCBI数据库得到牛QPCT基因的DNA序列（GenBank No.NC＿037338.1），利用Oligo7.56软件在牛QPCT基因外显子序列上设计引物F1和R1 （表1），交由生工生物工程公司（上海）合成。经PCR直接测序寻找SNP位点。PCR反应体系：1μL DNA样品（100 ng/μL），12.5μL 2×Es Taq MasterMix （US Everbright Inc，美国），上下游引物（20μmol/L）各0.5μL，ddH2O 10.5μL。PCR反应条件：94℃5 min，30个扩增循环（94℃30 s，50℃30 s，72℃35 s），72℃终延伸7 min。用浓度为1.2%的琼脂糖凝胶对产物进行电泳检测，并将产物交由上海生工生物公司测序，通过Chromas 2.4.1软件分析测序峰图以鉴定SNP位点。