《表1 杨树FBL基因家族定量PCR引物序列》

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《杨树miR393对FBL基因家族成员调控作用的鉴定》

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使用Primer3(http://frodo.wi.mit.edu/primer3/input.htm）对ptc-miR393和FBL家族基因进行定量PCR的引物设计，引物设计原则为20～25 bp长度，退火温度58～60℃，PCR产物长度为150～250 bp，引物序列见表1，其中PP2A-2为内参基因。定量PCR反应体系为：10μL KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix(#K4601，KAPA）、2μL上述稀释20倍的cDNA、定量上下游引物（10μmol）各0.8μL和6.4μL去离子水，每个样本进行4个技术重复。在LightCycler 480定量PCR仪（Roche）上进行定量PCR的运行，PCR扩增程序为：95℃3 s；95℃10 s，60℃30 s，72℃3 s，重复45个循环；95℃3 s。融解曲线分析条件：95℃5 s（以每s增加0.11℃的速率使65℃增至95℃）。