《表1 SRAP-PCR引物名称及序列》
DNA的提取采用CTAB法。毛樱桃ד晚黄李”后代F1-2及其亲本各取2g冷冻的嫩叶在液氮中研磨,65℃水浴0.5h,混匀。加入氯仿/异戊醇(CI),混匀,放置10min,12 000r·min-1离心10 min,重复2次;-20℃静置30 min;12 000r·min-1离心10 min,弃上清液,70%乙醇冲洗沉淀3次,晾干。加50μL TE溶解DNA,同时加入1μL RNase,37℃反应1h,利用琼脂糖凝胶电泳法测定DNA浓度。SRAP分析:SRAP引物采用张琪静[11]已发表UCD-CH11、UDP98-412的2对序列及1对随机引物A1(表1),引物由北京康普森生物有限公司合成。扩增反应在美国Abi Veriti型基因梯度PCR仪上进行。扩增体系如下:反应体积20μL,H2O12.7μL,2.4μL Mg2+(15mmol·L-1),0.8μL dNTPs(2.5mmol·L-1),1.5μL引物(5μmol·L-1),0.1UTaq DNA聚合酶(5U·μL-1),2.5ng模板DNA(15 ng)。扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min,34℃复性1min,72℃延伸1min,33个循环;72℃延伸9min。PCR产物经6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。重复3次。
图表编号 | XD001631600 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2018.03.30 |
作者 | 张建瑛、田新华、殷东生、李静、李京 |
绘制单位 | 黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省林业科学研究所 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |