《表2 SRAP-PCR正向和反向引物序列》

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《亚麻木酚素含量与遗传多样性的评价》

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取出-80℃保存的亚麻嫩叶，用玻璃棒破碎，参照Stewar等[10]提出的CTAB法提取基因组DNA，用琼脂糖凝胶和核酸蛋白测定仪检测DNA的纯度和浓度。按Li等[11]提出的SRAP分子标记引物设计方法合成了13个正向引物和13个反向引物（表2），随机组成169对引物。以h-28、n-4、g-12、s-13、A-14、E-114等6份亚麻种质基因组DNA为模板，进行反应体系的优化，筛选出了11对多态性引物。本试验在25μL PCR反应体系，正反向引物分别为0.3μmol/L、2×Taq Master Mix（0.1U/μL Taq DNA聚合酶、3mmol/L MgCl2、0.4mmol/L dNTP、反应缓冲液）9.0μL、DNA模板量40ng。PCR扩增程序为:94℃5min；94℃1min，35℃1min，72℃1min，5个循环；94℃1min，50℃1min，72℃1min，35个循环；72℃10min，4℃保存。扩增产物用6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，恒功率80W电泳2h，采用银染法显色[12]。