《表1 CL14-3-3引物》

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《杉木CL14-3-3-e基因克隆及其在干旱胁迫下表达分析》

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提取杉木叶片总RNA，分光光度计测定其OD值（OD260/OD280）为1.91，浓度为119.33 ng/μL，1%琼脂凝胶电泳检测到28S和18S两条带，完整性较好（图1A）。根据NCBI上获取14-3-3蛋白的编码序列，通过多序列比对，确定CL14-3-3的保守区域，由Primer Premier 5软件设计简并引物CL-F、CL-R，克隆后共得到5条14-3-3基因，经过测序比对，其中4条为已知基因CL14-3-3-a、CL14-3-3-b、CL14-3-3-c以及CL14-3-3-d（倪点乐，2013），1条为新14-3-3基因。针对新基因设计引物GSP-1、GSP-2，进一步通过RACE技术，参照保守区序列分别进行5'端和3'端RACE（图1B），获得基因末端序列；3个片断序列经拼接获得基因cDNA序列全长，命名为CL14-3-3-e。BLAST比对分析表明该基因编码的蛋白为杉木14-3-3基因家族新成员（图2；表1）。