《表1 引物序列：杉木Cl4CL基因的克隆及表达分析》

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《杉木Cl4CL基因的克隆及表达分析》

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从杉木转录组（登录号:GSE113410）中筛选4CL（comp54114＿c0）序列，利用该序列分别设计正向引物4CL-F和反向引物4CL-R（表1）。选取杉木无性系39号CK培养3 d的幼苗，以根总RNA为模板，逆转录后利用20μLPCR反应体系进行扩增，该PCR反应体系主要包括：2.0μL 10×Taq Buffer（Mg2+free），1.2μL Mg Cl2（25 mmol/L），1.6μL dNTP（2.5 mmol/L），pfu酶（5 U/μL）0.2μL，cDNA 2μL，正、反向引物各0.4μL（10μmol/L）。PCR反应过程主要包括变性、退火、延伸，该PCR的具体过程为：95℃预变性5 min，30个循环包括：95℃变性5 s，60℃退火20 s，72℃延伸20 s；最后72℃延伸10 min。扩增产物回收纯化后与载体链接并转化到大肠杆菌感受态细胞中，37℃培养箱中培养过夜后筛选阳性克隆测序。