《表3各筛查元件和油菜内标基因的核苷酸序列、标准方法信息》

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《转基因油菜筛查阳性质粒分子的研制及应用》

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表中CT-PCR表示普通PCR，RT-PCR表示实时荧光PCR

合成9个筛查元件和2个油菜内标基因的1个引物/探针组合（电子附表1），进行实时荧光PCR分析。将质粒分子p YCSC-1905梯度稀释，浓度依次为106、105、104、103和102 copies/μL。将梯度稀释的质粒溶液用作标准品，分别进行筛查元件和油菜内标基因的实时荧光PCR扩增。扩增结束后，根据质粒模板拷贝数的对数与Ct值间的对应关系分别绘制各个靶标的标准曲线，计算出标准曲线的斜率，将标准曲线的斜率带入公式，计算出以筛查质粒分子作为模板，各个靶标的扩增效率（图3）。9个筛查元件和2个油菜内标基因的扩增效率均在90%—110%，符合标准对实时荧光PCR扩增效率的要求。扩增效率测试结果表明，融合构建到质粒分子pYCSC-1905上的筛查元件和油菜内标基因的核苷酸序列没有干扰引物/探针与模板序列的特异识别，p YCSC-1905适合用作转基因油菜普通PCR和实时荧光PCR筛查检测的质控样品。