《表1 引物及干扰片段序列》

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《泛素偶联酶Ubc-9对布鲁氏菌胞内生存及细胞凋亡的影响》

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pLL3.7-U1和pLL3.7-U2是Ubc-9基因的干扰片段

对收集的细胞进行总RNA提取，并将其反转录合成cDNA。以β-actin为内参基因，使用Primer Premier 5.0设计引物，送往上海生物工程有限公司合成（引物信息见表1）。检测Ubc-9基因表达量的PCR反应体系为10μL:SYBR Green Realtime PCR Master Mix 5μL，Ubc-9或β-actin上下游引物各0.2μL，dd H2O 3.6μL，cDNA模板1μL。PCR反应条件：95℃30 s；95℃5 s、60℃10 s、72℃15s，40个循环。利用2-ΔΔCt（Hayashi et al.，2002）方法进行相对定量分析。