《表1 淀粉合成关键酶基因qRT-PCR引物序列》

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《山药块茎膨大期淀粉合成关键酶活性及调控基因的表达分析》

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采用RNA提取试剂盒（TakaRa MiniBest Plant RNA Extraction Kit）分别提取B1、APB58在不同发育时期块茎的总RNA，通过试剂盒（PrimeScriptTMII 1st Strand cD-NA Synthesis Kit）反转录成单链cDNA，稀释浓度到200 ng·μL-1。从山药块茎发育的RNA-seq测序结果（已进行q PCR验证）中找到与山药淀粉合成、积累相关的关键酶基因Isoamylase 3、Starch synthase 3、SPS 1和PFK 3，并根据获得的基因序列，以山药的18 S为内参基因，利用Primer Premier5.0软件设计引物（序列信息见表1）。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）的方法检测基因的相对表达量。qRT-PCR采用TB GreenTMPremix Ex TaqTM（Tli RNaseH Plus），Bulk试剂盒。反应体系为:cDNA 2μL（200 ng·μL-1），正反向引物各1μL（10μmol·L-1），SYBR Premix Ex TaqⅡ25μL，ddH2O 21μL。每个样品3次重复。利用2-ΔΔCT法计算基因的相对表达量。