《表1 本研究使用的引物：新城疫P蛋白磷酸化位点的质谱分析和功能鉴定》

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《新城疫P蛋白磷酸化位点的质谱分析和功能鉴定》

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根据质谱分析和基因比对分析结果，分别对La Sota毒株P蛋白氨基酸的Ser56、Ser77、Thr78、Thr82、Ser141和Ser164位6个磷酸化位点进行定点突变。根据丙氨酸扫描原理分别设计6对定点突变引物，以pCI-P为模板，扩增P基因突变质粒，引物序列见表1。PCR反应条件：95℃变性20 s、55℃退火30 s、72℃延伸5 min，30个循环后72℃延伸10 min。用琼脂糖核酸胶回收试剂盒（天根）纯化回收PCR产物，然后在37℃条件下用Dpn I酶切消化1 h。将消化的产物转化至E.coli DH5α感受态，用无内毒素小提中量试剂盒提取质粒，酶切鉴定正确的阳性重组质粒由上海生工生物工程技术服务有限公司测序。