《表1 本研究使用的引物:甘蔗PsbS亚基应答甘蔗花叶病毒侵染及其与6K2蛋白的互作研究》

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《甘蔗PsbS亚基应答甘蔗花叶病毒侵染及其与6K2蛋白的互作研究》


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SCMV-FZ1病毒株系[72]、甘蔗品种Badila和本氏烟(Nicotiana benthamiana)由福建农林大学农业农村部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室提供。本氏烟用于亚细胞定位和Bi FC实验,在光周期为16 h光照/8 h暗,光照强度为130μmol m–2 s–1,温度为22℃和空气湿度为60%的条件下培养。参照翟玉山等[73]的方法,研究目的基因Sc Psb S应答SCMV侵染的表达模式。采用腋芽快繁技术培养Badila组培苗,培养条件为光强200μmol m–2 s–1,光周期16 h光照/8 h暗,温度28℃,空气湿度60%。待组培苗长至15~25 cm、出现4~5片完全展开的叶片时,摩擦接种SCMV,设置3个重复,每个重复3株,在光培养期间的第1小时后接种,使用磷酸缓冲液(p H 7.0)摩擦接种对照植株,取接种部位,使用SCMV-CP基因特异引物(表1)检测接种是否成功。分别在接种后0 h、4 h、8 h、12 h、1 d、3 d、5 d、7 d取样。从福建农林大学隔离网室中选取长势一致的伸长期甘蔗品种Badila健康植株,于早上9点取未成熟叶心叶、成熟叶片正一叶(甘蔗植株由上到下第一个有可见肥厚带的叶片)、初衰叶片正七叶、未成熟节间第三节间、完成形态建成的第八节间和根,用于基因的组织特异性表达实验,设3个生物学重复,每个生物学重复设置3株。取样后用液氮速冻,置-80℃冰箱保存备用。